高效液相色譜系統是應用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。由以下幾個部分構成:
高效液相色譜系統主要有分析型、制備型和專用型三類。
一般由五個部分組成:
高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、數據處理系統
1、高壓輸液系統:一般由貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等組成。
①、貯液器:貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純,貯液器材料要耐腐蝕,對溶劑呈惰性。貯液器應配有溶劑過濾器,以防止流動相中的顆粒進入泵內。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成,空隙大小一般為2mm。
②、高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜系統的重要部件,是驅動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統的高壓源,其性能好壞直接影響分析結果的可靠性。
③、脫氣裝置:脫氣的目的是為了防止流動相從高壓柱內流出時,釋放出氣泡進入檢測器而使噪聲劇增,甚至不能正常檢測。
2、進樣器:
進樣器一般要求密封性好,死體積小,重復性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統的壓力和流量波動小,并便于實現自動化。
高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多,有六通閥、四通閥,雙路閥等。以六通進樣閥最為常用。
3、分離系統:
色譜分離系統包括色譜柱、固定相和流動相。色譜柱是其核心部分,柱應具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用優質不銹鋼管制成。
色譜柱按內徑不同可分為常規柱、快速柱和微量柱三類。
常規分析柱柱長一般為10~25cm,內徑4~5mm,固定相顆粒直徑為5~10mm。為了保護分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,約數厘米長,稱為保護柱。
4、檢測系統:
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發光等。
5、數據處理系統:
早期的 HPLC 只配有記錄儀記錄色譜峰,用人工計算 A或 H。隨著計算機技術的發展,簡單的積分儀,可自動打印出 H、A和 tR,作一些簡單的計算,但不能存儲數據。
現在的色譜工作站功能增多,一般包括:色譜參數的選擇和設定:自動化操作儀器;色譜數據的采集和存儲,并作“實時”處理;對采集和存儲的數據進行后處理;自動打印,給出一套完整的色譜分析數據和圖譜。同時也可把一些常用色譜參數、操作程序,及各種定量計算方法存入存儲器中,需用時調出直接使用。